- Рецепт питательные среды агара
- Группа компаний «Униконс»
- «Антисептики Септоцил»
- «Петритест»
- Работа № 7. Приготовление питательных сред для выращивания микроорганизмов
- Статьи
- Как вырастить колонии бактерий в чашке Петри в домашних условиях
- Агары для микробиологии и пищевой промышленности
- Агар в составах питательных сред для насекомых
- Составы питательных сред для культуры растительных тканей
- Питательная среда для микроорганизмов
- Составы для применения агара в промышленности
- Общепринятый состав (в %):
- НОВЕЙШИЕ РАЗРАБОТКИ
- Таблица 2.5. Некоторые легкорастворимые агары: сравнительный анализ
Рецепт питательные среды агара
Рецепт 61. Мясопептонный агар. МПА применяют для выращивания неприхотливых микроорганизмов и как основу специальных сред для культивирования более требовательных микробов (сывороточного, кровяного, асцитического агара и др.)
Пептон — 10,0-20,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Агар — 10,0-20,0 г
Вода мясная — 1000 мл
Смесь пептона, хлорида натрия и мясной воды кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения ингредиентов. Бульон фильтруют, устанавливают pH и добавляют измельченный агар (в зависимости от качества агара и назначения среды). Затем среду кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. При помутнении среды ее просветляют одним из известных способов. Приготовленную среду разливают в пробирки или во флаконы, стерилизуют в автоклаве при 121 °С в течение 20 мин.
Рецепт 62. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient Broth, Cat. M002):
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
pH 7,4(±0,2)
Суспендируют 13 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Среду используют для выращивания неприхотливых микробов. Добавление крови, сыворотки и других ингредиентов делает ее пригодной для роста требовательных микроорганизмов.
Рецепт 63. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient agar, Cat. M001). Питательный агар рекомендуют использовать для выращивания широкого спектра микроорганизмов, не требующих специальных питательных добавок.
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
Агар — 15,0 г
pH 7,4 (±0,2)
Суспендируют 28 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят при постоянном помешивании до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.09.2019
Группа компаний «Униконс»
Продвижение и реализация пищевых добавок, антисептиков и другой продукции НПО Альтернатива.
«Антисептики Септоцил»
Септоцил. Бытовая химия
Септоцил — ваш выбор в борьбе за чистоту
«Петритест»
Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.
- Вы здесь:
- Библиотека технолога
- Микробиология
- Мармузова Л. В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены производства хлебобулочных и мучных кондитерских изделий
Работа № 7. Приготовление питательных сред для выращивания микроорганизмов
Приборы и посуда: термометр, сахариметр, весы технические с разновесами, деревянная мешалка, эмалированная кастрюля, водяная баня, мерный цилиндр, пробирки.
Материалы и реактивы: крупнодробленый ячменный солод, агар, раствор йода, бульонные мясные кубики, пептон, молоко, хлорид натрия, желчь, глюкоза, кристаллический фиолетовый.
Порядок выполнения работы
1. Приготовление затора.
Приготовить раствор йода. Для этого растворить 1 г йодистого калия в 5 мл воды, к полученному раствору добавить 1 г йода и довести объем смеси дистиллированной водой до 300 мл.
В эмалированную кастрюлю насыпать 1 часть солода, добавить 4 части теплой воды и перемешать. Температура смеси должна быть 50 °С. Поставить кастрюлю на водяную баню при 50 °С и выдерживать в течение 30 мин. Затем подогреть баню, чтобы температура смеси повысилась до 63-65 °С, и выдерживать при этой температуре до прекращения окрашивания раствора при добавлении йодного раствора (йодная проба на содержание крахмала).
Полученный затор разлить в пробирки.
2. Приготовление сусла.
Подготовленный затор профильтровать через полотно. Полученный фильтрат нагреть до кипения и кипятить 5-10 мин. Выпавший при кипячении осадок отфильтровать.
Сусло развести водой до плотности 8-10 % по сахариметру, разлить в сосуды и простерилизовать в автоклаве при 0,05 МПа в течение 30 мин.
3. Приготовление сусло-агара.
К готовому суслу добавить 2% агара, и смесь нагреть до расплавления агара. Затем разлить в пробирки и колбы и простерилизовать.
4. Приготовление мясо-пептонного агара.
5 бульонных мясных кубиков (20 г) растворить в 1 л воды. Добавить 100 г пептона и 2% агара. Агар расплавить, и среду кипятить в течение 30 мин. После кипячения смесь профильтровать через марлю и вату и простерилизовать в течение 10 мин.
5. Приготовление обезжиренного молока.
Молоко процентрифугировать. Удалить сливки. Затем разлить в пробирки по 5 и 10 мл и стерилизовать при температуре 121 °С в течение 10 мин.
6. Приготовление солевых бульонов.
Отмерить 100 мл мясо-пептонного бульона и добавить к нему 6 или 9,5% хлорида натрия. Разлить в пробирки по 5 мл и стерилизовать при температуре 121 °С в течение 20 мин.
7. Приготовление молочно-солевого агара.
Мерным цилиндром отмерить 100 мл 2%-ного стерильного агара, содержащего 6,5 % хлорида натрия. Добавить к нему 10 мл обезжиренного стерильного молока.
8. Приготовление мясо-молочного агара.
Мерным цилиндром отмерить 100 мл стерильного мясо-пептонного агара. Добавить 10 мл обезжиренного стерильного молока.
9. Приготовление физиологического раствора. Отмерить 1 л водопроводной воды. Взять навеску массой 8,5 г хлорида натрия и растворить в воде. Раствор разлить в чистые пробирки диаметром 18-20 мм по 10 мл или в колбы — по 93 мл. Стерилизовать в течение 20 мин.
После стерилизации в пробирках остается около 9 мл физиологического раствора, а в колбах — около 90 мл, т. е. такое количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала.
10. Приготовление среды Кесслера.
Отмерить 1 л водопроводной воды, прибавить 10 г пептона и 50 мл желчи. Смесь прокипятить при помешивании в течение 20-30 мин на водяной бане. Затем профильтровать через слой ваты. В полученном фильтрате растворить 2,5 г глюкозы и довести объем до 1 л. рН среды довести до значения 7,4-7,6. Добавить 2 мл 1 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового.
Среду разлить в пробирки с поплавками и стерилизовать при давлении 0,01 МПа в течение 10 мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.
Статьи
Как вырастить колонии бактерий в чашке Петри в домашних условиях
У Вас появился инвертированный биологический микроскоп Эврика 40х-320х! Вы изучили под ним воду из канавы, воду из вазы с букетом цветов… Вы посмотрели все, что можно было быстро налить в чашечку Петри. Что же теперь? Давайте попробуем провести настоящие научные исследования. От Вас потребуется терпение, время и фантазия.
Мы вырастим колонии бактерий в чашечке, которая идет в комплекте с микроскопом. Вы можете приобрести несколько чашек, чтобы выращивать несколько разных колоний одновременно. Думаю, Вы будете поражены разнообразием бактерий, которые окружают нас.
Будьте осторожны! Эти опыты рекомендуются для детей старше 8 лет и только под наблюдением взрослых! Опыты включают использование кипящей воды и хлорки. Взрослый контроль обязателен!
• Порошок агар-агар. Он продается в продуктовых магазинах в том же отделе, где ванилин, желатин, корица и другие вкусности для выпечки.
• 1 чайная ложка сахара.
• Маленькая кастрюлька или ковшик для кипящей смеси.
• Инкубатор. В качестве инкубатора мы будем использовать какое-нибудь теплое место. Зимой удобно использовать место рядом с обогревателем. А летом, когда батареи выключены, можно использовать место за холодильником.
Для начала не забываем пригласить взрослого человека присоединиться к нашему опыту. Нам очень потребуется его помощь.
1. Наливаем воду в кастрюлю (ковшик) и доводим до кипения. Растворяем сахар в этой воде.
2. Добавляем порошок агар-агар в кипящую воду и перемешиваем в течение минуты, пока он полностью растворится.
3. Охлаждаем смесь в течение нескольких минут. Во-первых, смесь должна быть еще горячей, чтобы избежать установки желе прямо в кастрюле. А во-вторых, нам необходимо предотвратить загрязнение нашей смеси бактериями из воздуха. Наши домашние условия далеки от стерильности, но мы постараемся избежать лишних загрязнений.
4. Открываем чашку Петри. И сразу просим взрослого помощника налить на ее дно горячую смесь из кастрюльки. Заранее открывать не надо, чтобы лишние бактерии не мешали нашему опыту.
5. Накрываем крышкой чашку Петри и убираем ее в холодильник примерно на 4 часа. За это время установится желе.
6. Теперь пришло время собирать бактерии и выращивать колонии на агар-агаре в чашке Петри.
Примечание: чашки Петри с застывшим агар-агаром можно хранить в холодильнике в течение 1-2 месяцев перед использованием. Нужно их перевернуть, чтобы конденсат не испортил подготовленную питательную среду.
7. Бактерии собрать не трудно, потому что они есть повсюду. Берем чистую ватную палочку и проводим ею там, где хотим найти бактерии – на грязной посуде или под ногтями на руках, или на земле, или на ручке двери, или на мобильном телефоне, или на клавиатуре. Потом аккуратно проводим этой палочкой по застывшему агар-агару в чашке Петри.
8. Закрываем чашки Петри крышками и заклеиваем скотчем. Чтобы не перепутать чашки, наклеиваем на них наклейки с надписями (откуда были собраны бактерии). Переворачиваем и убираем в инкубатор (теплое темное место). Переворачивать нужно для того, чтобы капли, которые могут образоваться на крышке от испарения, не падали на наш объект исследования. Оставляем на несколько дней.
9. Через несколько дней можно наблюдать под микроскопом, что происходит в чашке Петри. Мы увидим, как начали расти колонии. Раз в день или раз в несколько дней можно проверять, какие происходят изменения.
10. Хотя бактерии, которые мы собрали дома, вероятно, будут безвредными, предосторожность не помешает. Нам снова потребуется помощь взрослого, поскольку пластмассовую чашку Петри нужно хорошенько вымыть хлорным раствором, и только потом утилизировать. Если у Вас стеклянная чашка Петри, то ее можно использовать повторно после стерилизации. Напомните Вашему взрослому помощнику о необходимости надеть резиновые перчатки. Ни в коем случае не работайте с хлоркой самостоятельно!
Если опыт не получился с первого раза, не отчаивайтесь. Попросите совета у учителя биологии в школе. Некоторые виды бактерий любят животную среду, и для них нужно добавить в агар-агар питательную среду, например говяжий бульон. Другие бактерии хорошо размножаются на растительно среде, для них можно добавить картофельный отвар.
Почему это происходит?
Бактерии настолько малы, что их нельзя увидеть невооруженным глазом. Но если их поместить на питательную среду и создать им комфортные условия для размножения, то каждая бактерия вырастает в колонию из тысячи бактерий. И вот колонию уже можно разглядеть в микроскоп. Вырастить бактерии может оказаться не просто. Поэтому не сдавайтесь, если ваши первые попытки потерпят неудачу. Но когда опыт будет удачным, подсчитайте количество колоний и обратите внимание на различия в цвете, форме и размере. Где Вы обнаружили больше бактерий? Попробуйте в середину растущей колонии добавить капельку дезинфицирующего средства для рук или средство для мытья унитаза. Произойдут ли изменения в росте и форме колонии?
Агары для микробиологии и пищевой промышленности
Агар в составах питательных сред для насекомых
Агар используется при разведении личинок и других мелких видов насекомых. Крошечные черви могут питаться только появившимися из раскрывшейся почки нежными листьями тутового дерева. Агар применяется круглый год для откорма шелковичных червей с целью увеличения продолжительности их жизнедеятельности, которая ранее была ограничена сезонными рамками. С этой целью агар растворяется в корме, представляющим собой раствор углеводов и белков. После охлаждения смесь экструдируют в форме тонких спагетти, размеры которых адекватны строению червя в различные периоды его развития — с момента вылупле-ния до образования шелковичных куколок. Для приготовления такого корма подходит только агар, так как все остальные гелеобразователи обладают вкусом, отталкивающим червей.
Другое традиционное использование агара — это его аналогичное применение для откорма личинок мухи Drosophila melanogaster, которая используется для генетических исследований. Очевидно, что в период развития биологических методов борьбы с насекомыми — возбудителями чумы стали применяться аналогичные методы откорма личинок с использованием агара в качестве питательной основы. Это было связано с необходимостью введения новых методов контроля насекомых, которые наносили большой ущерб урожаям. Так, средиземноморская муха, уничтожающая сады, или гусеницы Pecdnophora glosipei, которые наносят ущерб хлопковым полям, специально выращиваются и стерилизуются гамма-облучени-см. Затем у стерилизованных насекомых поддерживают состояние «спячки» и выпускают их только в период спаривания. Поскольку эти насекомые способны спариваться только один раз в жизни, а их способность к оплодотворению нарушена, это препятствует размножению нестерилизованных особей, с которыми они спариваются. Таким образом, не прибегая к хлорорганическим инсектицидам, можно контролировать количество насекомых, при этом не убивая их, так как некоторые особи сохраняют возможность к размножению, оплодотворяясь не-стсрилизованными насекомыми.
Составы питательных сред для культуры растительных тканей
Гелеобразующие свойства агара улучшают состав твердой питательной среды для получения культуры тканей, что изначально было использовано для получения клонов орхидей. Состав питательной среды подбирается таким образом, чтобы воспроизвести растительные образцы для последующего выращивания них идентичного растения, но свободного от вирусов. Обычно меристему растений, подлежащих культивированию, выращивают на питательной среде соответствующего состава, обогащенную фитогормонами, такими как ауксины или цнтокинппы, выбор которых зависит от заданного процесса корнеобразо-вания и/или регулирования его скорости. После того как будет достигнута необходимая стадия развития растения, оно переносится в растительную почву для продолжения роста.
Питательная среда для микроорганизмов
Культивирование микробов было впервые разработано Р. Кохом в 1882 г., и с тех Юр этот метод остается настолько популярным в микробиологии, что все попытки Заменить его потерпели неудачу. Благодаря особым свойствам физических гелей, полученных из агара, температурам гелеобразования и плавления, а также их огромному гистерезису и обратимости, применение агаровых гелей в микробиологии уникально, и до сих пор достойной замены им не найдено. Более того, их огромная устойчивость к ферментативному расщеплению, не характерная для других геле-образователен, а также способность образовывать гели в отсутствие катионов, позволяют использовать агары для создания питательной среды с регулируемым осмотическим давлением в зависимости от потребности клетки. Это позволяет вы-ращивать эритроциты, бактерии, дрожжи или плесневые грибы.
Составы для применения агара в промышленности
Агар очень широко применяется в тех областях промышленности, где требуется высокоточная формовка, и мы предлагаем один из примеров такого возможно-го применения. В США этот состав используется для приготовления слепков в стоматологии (Стоматологические слепки; Миэр В. (Meer W), 1980), в других же странах — для гипсовых слепков археологических фрагментов или скульптур. криминалистике агар применяется для сохранения отпечатков следов или других улик. Стимулом широкого использования является необыкновенная способность гелей агара к обратимости, благодаря которой путем простого охлаждения агap превращается из раствора в гель.
Гели можно сохранять очень долгое время в тюбиках, подобных тюбикам для зубиых паст. Перед употреблением содержимое тюбика расплавляют в емкости с кипящей водой, а затем расплав переносят в форму, предназначенную для изготовления зубного оттиска. Как только достигается необходимая температура 39°С), делают оттиск зуба (или другого предмета, подлежащего копированию), одерживая при температуре 36°С до образования агарового геля. Для этой цели, как правило, применяется агар, выделенный из агарофита рода Gelidium.
Не рекомендуется использовать другие виды агаров, образующие гели при бо-лее высокой температуре, поскольку они могут вызывать неприятные ощущения у пациентов. Однако эти ограничения не распространяются на неодушевленные предметы, при работе с которыми можно использовать другие агары.
Общепринятый состав (в %):
| Агар Gelidium | 13. 17 |
| Бораты | 0,2. ..0,5 |
| Сульфаты | 1. 0..2.0 |
| Твердый воск | 0,5. 1,0 |
| Тиксотропные материалы (продукты типа бентонит) | 0,3. 0,5 |
| Вода | до 100 |
Этот состав может быть модифицирован для получения гелей, которые на практике не будут высыхать при обычных атмосферных условиях. Для этого необходимо добавить сорбит, глицерин или любой другой увлажняющий агент, который будет поглощать влагу из окружающей среды, компенсируя потери при испарении. При обычных атмосферных условиях требуется добавлять 8. 10% глицерина, но это количество надо регулировать в зависимости от максимальной и минимальной температур, которые может выдерживать продукт, а также относительной влажности воздуха.
НОВЕЙШИЕ РАЗРАБОТКИ
На протяжении долгого времени ученые стремились создать агар, который одновременно обладал бы хорошими гелеобразующими свойствами и был бы легкорастворимым. Предпринимались попытки получения агаров, растворимых при температурах ниже 100 °С. Это позволило бы изготавливать продукты, которые не выдерживают температур выше 85 °С. Параллельно с этим ученые стремились повысить прочность геля промышленных агаров при уменьшенном их содержании в составе продукта, чтобы снизить стоимость, поскольку агар является одним из самых дорогостоящих ингредиентов. В целом, ученые стремились повысить прочность геля, увеличив среднюю молекулярную массу и уменьшив содержание сульфатов в составе промышленных агаров. Чтобы растворить агары такого типа, требуется дольше поддерживать температуру кипения. Фактически, в случае продуктов с высоким содержанием сахара (сахарозы), процесс растворения из-за присутствия сахарозы всегда происходит при температуре, превышающей 100 °С.
Есть новые виды агаров, которые растворяются при более низких температурах и за более короткое время. Такие агары были разработаны недавно, в попытке достичь, казалось бы, две противоположные цели: более низкая температура растворения и при этом минимальные потери прочности геля. Один из методов, используемый для некоторых агаров такого типа, основан на добавлении путем механического давления веществ, которые прочно связываются с агаром в сухом состоянии, а при растворении ускоряют связывание молекул агара с молекулами воды. Недостатком агаров, полученных таким способом, является пониженная прочность геля в обмен па более низкую температуру растворения (т. к. возросла концентрация агента, не обладающего гелеобразующей способностью). Следовательно, как ингредиент, агар теряет некоторые свои свойства и имеет ограниченные возможности использования в биотехнологии, в частности, при получении микробиологических питательных сред, поскольку присутствие в нем добавленного инородного вещества может оказать отрицательное влияние или полностью ингибировать развитие организмов.
В других случаях процессы производства усовершенствуют таким образом, чтобы обеспечить возможность связывания молекул агара с молекулами воды при низкой температуре, но без использования добавок, что позволяет сохранять обычную для агара прочность геля. Вследствие этого не происходит изменения его гелсобразуюгдей способности и не нарушаются функции, на которых основано его использование в биотехнологии. Применение таких агаров зависит от соотношения цены и выгоды, которую он может принести компаниям — производителям пищевых продуктов. ‘Гак как эта новинка поступила на рынок лишь в конце 1990-х годов, она еще не получила широкого распространения во всех традиционных для агара областях применения. В табл. 2.5 приведен сравнительный анализ двух типов таких легкорастворимых агаров, образцы которых были в нашем распоряжении в достаточном количестве и были протестированы в наших лабораториях. Во всех случаях указана прочность геля, растворенного при температуре 80 °С.
Таблица 2.5. Некоторые легкорастворимые агары: сравнительный анализ
| Показатель | Grand Agar (производство «Hispanagar», Испания) | Speed Agar-80 (производство «Taito», Япония) | |
| 7,16 | 7,08 | |
| 1,53 | 1,47 | |
| 26 | 510 | |
| 6,80 | 6,18 | |
| 6,48 | 6,56 | |
| 6,5 | 4 | |
| 31,9 | 34,9 | |
| 87,5 | 75,6 | |
|